什么是考马斯亮蓝法（Bradford法）？

bradford法测定蛋白质含量的原理是：考马斯蓝G250与蛋白质结合后可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读取，标准蛋白质与G250结合后显色，建立标准曲线

加入测定对象蛋白质，与G250结合显色后，将读数代入标准曲线测定蛋白质含量。 不利的原因主要是特殊的蛋白质结构，缓冲液成分有干扰试剂等。

Western中考马斯亮蓝的作用是什么？

商务亮蓝g-250 ( coomassiebrilliantblueg-250 )测定蛋白含量是一种染料结合法。 考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，

最大光吸收为488nm； 与蛋白质结合后变成青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长处有最大的光吸收。 其光吸收值与蛋白质的含量成正比，根据这个理由可以用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250的结合在2min左右的时间内达到平衡，反应非常快，其结合物在室温下1小时内稳定。 该方法由Bradford于1976年创立，试剂制备简单，操作简单方便快捷，反应灵敏，

灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0~1000g/mL，是常用的微量蛋白质快速测定方式。 考马斯亮蓝有G250和R250两种。

这是由于中考深蓝G250与蛋白质结合反应非常快，常用于蛋白质含量测定。 考马斯亮蓝R250与蛋白质反应较慢，但溶出，可用于电泳谱带染色。

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的过程该方法对大多数蛋白质的定量比较准确，但不适用于小分子碱多肽的定量。 核糖核酸酶和溶菌酶等。 去污剂浓度超过0.2%会影响测定结果。

例如TritonX-100、SDS、NP-40等。 1.Bradford浓染液的制备：将考马斯亮蓝g-250100mg溶解在50m195%乙醇中，加入100ml浓磷酸后，用蒸馏水补充至200ml，

该染液稳定在4以上6个月。 2 .标准曲线蛋白标本准备：尽量使用性质与待测标本相近的蛋白作为标准品，如测定抗体，可用纯化抗体作为标准。 假设标本未知，抗体也可以作为标准蛋白质。

通常，用20ug—150ug/100ul制作标准曲线。 3 .将待测样品溶解在100~1的缓冲溶液中。 该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好使用PBS )。 4 .用蒸馏水按1:5稀释浓染料结合溶液，

发生沉淀时，过滤除去。 5 .向各样品中加入稀释的染料结合溶液5ml，作用5~30rain。 染液与蛋白质结合后，由红色变为蓝色，在波长595nm处测定吸光度。 请注意，

显色反应不得超过30min. 6。 按照标准曲线计算测定对象样品的浓度。

蛋白胶用考马斯亮蓝法大多数情况下染多久？

蛋白胶采用考马斯亮蓝法多染半小时以上不退色

考马斯亮蓝脱色的标准？

商业亮蓝脱色液是蛋白质凝胶经商业亮蓝染色后脱色的溶液。 脱色1小时可观察到蛋白带； 为了观察到最清晰的蛋白质带，脱色需要时间

考马斯亮蓝的应用？

考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue）一定范围内与蛋白质浓度成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。这当中考马斯亮蓝G-250因为与蛋白质的结合反应十分快速，经常会用到来作为蛋白质含量的测定。

考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是，可以被洗脱下去，故此，可以用来对电泳条带染色。

考马斯亮蓝g-250法测定蛋白质含量的优势？

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为01,000g/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。

考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式有哪些优点？

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为01,000g/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。

考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

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